T4多聚核苷酸激酶（T4 PNK）能够催化ATP的γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链（双链或单链DNA或RNA）的5´-羟基末端以及3´-单磷酸核苷上。T4 多聚核苷酸激酶还具有3´ 磷酸酶活性，将3´-磷酸基团从寡核苷酸的3´ 磷酸末端、脱氧3´-单磷酸核苷和脱氧3´-二磷酸核苷上水解掉。

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