引加生物的T7 RNA聚合酶采用大肠杆菌表达来源于T7噬菌体的RNA聚合酶基因，该酶具有高度的专一性，在镁离子存在的情况下，只会以含有T7启动子序列的单链或双链DNA为模板（ 5’-TAATACGACTCACTATAG*-3’），以NTP为底物，合成与启动子下游单链DNA互补的RNA。双链线性平末端或5’突出末端DNA均可作为T7 RNA聚合酶的底物模板，因此线性质粒、PCR产物均可用作体外合成RNA的模板。